讲述的是三位主人公，6岁的康诺、艾玛亚和葛瑞，在白天的时候，他们就像普通小孩一样去上学。但当这个城市发生危险时，这群充满好奇心和正义感的孩子们便会在夜里穿上睡衣，并激活他们的动物护身符。神奇地变成动感超级英雄，猫小子、猫头鹰女和飞壁侠，成为睡衣小英雄。他们一起对抗罗米欧、月之女和夜幕忍者这群夜间坏人们，阻止他们一系列的破坏行为。
《芭比公主手绘动画剧场》将芭比公主等卡通动漫人物通过手绘形式画出来，并制作成动画，芭比公主体验各种各样的美食，与此同时也会发生有趣好玩的故事。
