“雌雄大老千”是一套别开生面的二十集时装剧，它展示了九十年代香港社会功利的一面，但同时，亦对人的爱情、友情、亲情予以肯定。柯平坦〈张兆辉〉本来是一个小职员，但被自小相识的好友叶国基〈杨得时〉所利用，身陷牢狱，令坦一生起了转变。坦在狱中认识了梁亚鸡〈李显明〉二人遂成了好友，坦出狱后逼于生活，跟着鸡成了一个小老千，四处招摇撞骗，一次二人无意遇上了大老千吕清为〈王伟〉，被为看中并收坦为徒。坦自此便跟着为晋身成一个大老千，但一次误会，令坦与为打赌，二人打睹谁先骗到橡胶皇后阮希灵〈周海媚〉，谁知到头来，灵才是最大的老千，其后更惺惺相惜，便合作起来，坦在灵与为的教导下，成了一个专偷女人心的情场老千，而坦、灵在这段期间，亦互生了情愫。
王明（张鹏 饰）和妻子古秋霞（吴静娴 饰）育有五个子女，他们分别是秀秀（石安妮 饰）、冬冬（方向中 饰）、弯弯（胡家玮 饰）、佩佩（苏慧伦 饰）和彬彬（温兆宇 饰）。一次意外中，王明在车祸中不幸丧生，一下子，抚养五个孩子的重担全部落在了古秋霞一人的肩上。屋漏偏逢连夜雨，在这个节骨眼上，古秋霞得知自己患上了癌症，所剩时日无多。无奈之下，古秋霞决定求助于媒体，在得知了这一家人的情况后，有许多热心的人们向她伸出了援手。经过慎重的考虑和考察，古秋霞终于安顿好了自己的孩子们，她安心的闭上了眼睛。而对于五个兄弟姐妹们来说，除了要面对丧母之痛外，即将到来的分离也令他们感到心痛。
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